抗小鼠/兔通用型免疫组化检测试剂盒
Cat No : PK10006
Validation Data Gallery
产品介绍
该免疫组化检测试剂盒利用最新的聚合技术将多个过氧化物酶（HRP）分子及抗小鼠及抗兔免疫球蛋白 （IgG）偶联到多聚物上，形成的聚合物（二抗）具有放大信号增加敏感度、减少非特异性背景特点。 与兔或者小鼠一抗进行搭配使用，结合后再与 DAB 反应，可得棕色显色。该反应体系不含生物素和链霉亲 和素，不受内源性生物素影响，背景极低；只需要二步反应，即可完成实验过程。同时本试剂盒配有一 抗稀释液，可保证抗体的活性和稳定性，减少非特异性结合，降低非特异性背景染色。
组分 | 1mL | 6mL | 18mL | 55mL | 110mL |
山羊抗兔/小鼠 HRP 标记聚合物 | 1mL | 6mL | 18mL | 55mL | 110mL |
DAB 原液 20× | 75μL | 400μL | 1mL | 3mL | 3mL x 2 |
DAB 稀释液 | 1.5mL | 8mL | 20mL | 60mL | 120mL |
一抗稀释液 | 4mL | 24mL | 72mL | 220mL | 440mL |
注意：包装规格为1 mL、6 mL和18 mL的已配备 3% H2O2，55 mL和110 mL未配备。
保存条件
该试剂盒应在 2-8℃避光保存，并在有效期（一年）内使用，不得冻存。
使用方法（以石蜡切片染色程序为例）：
1) 将石蜡切片脱蜡至水：先将切片置于二甲苯中 20 分钟，2 次。然后依次在 100%，100%，95%，80%和 60%乙 醇，每级放置 5 分钟。再用蒸馏水浸洗 3 次，每次 3 分钟。
2) 抗原修复：根据抗原抗体情况，必要时对切片进行抗原热修复：加入柠檬酸修复液（货号：PR30001）或 tris-EDTA 修复液（货号：PR30002）后，将切片放置微波炉，中火修复 2 次，每次加热煮沸后 5 分钟。结束后在修复液中自然冷却。然后用 TBS 冲洗 3 次，每次 1 分钟。
3) 加入 3%H2O2，室温 10 分钟以灭活内源性过氧化物酶。TBS 冲洗 3 次，每次 1 分钟。
4) 封闭：用 TBS 制备 5%封闭血清（如无合适血清，可用 PBS（或 TBS）制备 3-5%BSA），室温 1 小时。 注意血清来源种属要与二抗来源种属一致（此试剂盒二抗来源于山羊，需用山羊血清）。
5) 孵育一抗：滴加适当一抗稀释液稀释一抗（兔或小鼠一抗），室温孵育 1~2 小时或者 4 度过夜孵育。 TBS 冲洗 3 次，每次 1 分钟。
6) 孵育二抗：滴加 50-100μL 抗兔/小鼠 HRP 标记聚合物，室温孵育 30 分钟，TBS 冲洗 3 次，每次 1 分 钟。
7) DAB 显色：滴加预制好的显色剂 DAB 工作液 50-100μL，室温孵育 5-10 分钟, 或者镜下控制反应时 间。蒸馏水洗涤。
8) 苏木素复染 2-3 分钟，然后蒸馏水冲洗。
9) 各级酒精（60-100%）脱水,每级 5 分钟。取出后置于二甲苯 5 分钟，2 次。用封片胶封片、显微镜观察。
注意
1.在抗原修复及后续免疫组化染色过程中都需避免组织切片干燥，保持湿润；
2.良好染色效果的获得很大程度上取决于标本制备和正确的实验方法，建议每批实验设置阴阳性对照；
3.本试剂盒一抗稀释液不能用于 HRP 标记一抗或者二抗的稀释；
4.DAB 工作液配制好后需避光保存，且最好在 30min 内用完；
5.本说明书所提供的操作方法仅供参考，如遇特殊情况需要根据实际情况进行调整。
产品应用 ：
DAB 工作液配制：在滴加 DAB 步骤前，将 DAB 原液与 DAB 稀释液按照 1：20 比例配制本次实验所需要的用量，混匀后避光备用。
Publications
| Application | Title |
|---|---|
Front Immunol Glycyrrhetinic acid regulates impaired macrophage autophagic flux in the treatment of non-alcoholic fatty liver disease | |
Adv Sci (Weinh) Self-Activated Cascade-Responsive Sorafenib and USP22 shRNA Co-Delivery System for Synergetic Hepatocellular Carcinoma Therapy. | |
Cell Death Dis Prevention of D-GalN/LPS-induced ALI by 18β-glycyrrhetinic acid through PXR-mediated inhibition of autophagy degradation. | |
Adv Sci (Weinh) RNAi Screening Identifies that TEX10 Promotes the Proliferation of Colorectal Cancer Cells by Increasing NF-κB Activation. | |
Adv Sci (Weinh) Prodrug-Loaded Zirconium Carbide Nanosheets as a Novel Biophotonic Nanoplatform for Effective Treatment of Cancer. |