CoraLite®594标记鬼笔环肽

使用方法

储液制备

取适量无菌水或甲醇溶解管中冻干的粉末，制备成 200 T/mL 的储液（300 T 规格染料加入 1.5 mL 的液体即可），避光保存。CL 荧光标记鬼笔环肽一个单位（T）的定义是染色一个加载细胞的载玻片所用染料的量。对于荧光标记的鬼笔环肽，使用时推荐稀释比例为 1:40-1:200，一个单位相当于 200 uL 总染色体积中加入 1-5 uL 200 T/mL 储备溶液。（注：稀释比例可以根据实际染色效果进行适当调整）                 

固定细胞染色

1.用 PBS 清洗细胞 3 次。 

2.用含有 4％ 多聚甲醛的PBS溶液冰上固定细胞 15 min。 

注：甲醇可以在固定过程中破坏肌动蛋白。因此最好避免含有任何甲醇的固定剂。 

3.用 PBS 清洗细胞 3 次。 

4.用含 0.2％ Triton X-100 的 PBS 溶液在室温下透化细胞 5 min。 

5.用 PBS 清洗细胞3次。 

6.用 200 uL PBS 稀释 1-5 uL 荧光标记的鬼笔环肽储液，加入一个盖玻片或孔中,室温孵育 20 min，进行染色。 

注：染色体积可根据样本情况进行调节，以覆盖样品为宜。孵育过程中为避免染液挥发，可将盖玻片放于湿盒内。

7.用 PBS 清洗细胞 2-3 次。 

8.荧光显微镜观察。为了效果最佳，可以使用抗荧光淬灭剂观察。 

活细胞染色 

荧光标记的鬼笔环肽不具有细胞透性，因此没有被广泛用于活细胞标记。有报道称活细胞可能通过胞饮或未知机制进行标记。一般来说，染色活细胞时需要更多的染料。荧光标记的鬼笔环肽也可被注入到细胞中用于监测肌动蛋白分布和细胞运动。