抗小鼠/兔通用型免疫组化检测试剂盒

Cat No : PK10006



产品介绍

该免疫组化检测试剂盒利用最新的聚合技术将多个过氧化物酶(HRP)分子及抗小鼠及抗兔免疫球蛋白 (IgG)偶联到多聚物上,形成的聚合物(二抗)具有放大信号增加敏感度、减少非特异性背景特点。 与兔或者小鼠一抗进行搭配使用,结合后再与 DAB 反应,可得棕色显色。该反应体系不含生物素和链霉亲 和素,不受内源性生物素影响,背景极低;只需要二步反应,即可完成实验过程。同时本试剂盒配有一 抗稀释液,可保证抗体的活性和稳定性,减少非特异性结合,降低非特异性背景染色。

组分

1mL6mL
18mL55mL110mL

山羊抗兔/小 HRP 标记聚合物

1mL6mL18mL55mL110mL

DAB 原液 20×

75μL400μL1mL3mL3mL x 2

DAB 稀释液

1.5mL8mL20mL60mL120mL

一抗稀释液

4mL24mL72mL220mL440mL


保存条件

该试剂盒应在 2-8℃避光保存,并在有效期(一年)内使用,不得冻存。

使用方法(以石蜡切片染色程序为例):

1) 将石蜡切片脱蜡至水:先将切片置于二甲苯中 20 分钟,2 次。然后依次在 100%,100%,95%,80%和 60%乙 醇,每级放置 5 分钟。再用蒸馏水浸洗 3 次,每次 3 分钟。 

2) 抗原修复:根据抗原抗体情况,必要时对切片进行抗原热修复:加入柠檬酸修复液(货号:PR30001)或 tris-EDTA 修复液(货号:PR30002后,将切片放置微波炉,中火修复 2 次,每次加热煮沸后 5 分钟。结束后在修复液中自然冷却。然后用 TBS 冲洗 3 次,每次 1 分钟。 

3) 加入 3%H2O2,室温 10 分钟以灭活内源性过氧化物酶。TBS 冲洗 3 次,每次 1 分钟。 

4) 封闭:用 TBS 制备 5%封闭血清(如无合适血清,可用 PBS(或 TBS)制备 3-5%BSA),室温 1 小时。 注意血清来源种属要与二抗来源种属一致(此试剂盒二抗来源于山羊,需用山羊血清)。 

5) 孵育一抗:滴加适当一抗稀释液稀释一抗(兔或小鼠一抗),室温孵育 1~2 小时或者 4 度过夜孵育。 TBS 冲洗 3 次,每次 1 分钟。 

6) 孵育二抗:滴加 50-100μL 抗兔/小鼠 HRP 标记聚合物,室温孵育 30 分钟,TBS 冲洗 3 次,每次 1 分 钟。 

7) DAB 显色:滴加预制好的显色剂 DAB 工作液 50-100μL,室温孵育 5-10 分钟, 或者镜下控制反应时 间。蒸馏水洗涤。 

8) 苏木素复染 2-3 分钟,然后蒸馏水冲洗。 

9) 各级酒精(60-100%)脱水,每级 5 分钟。取出后置于二甲苯 5 分钟,2 次。用封片胶封片、显微镜观察。

注意

1.在抗原修复及后续免疫组化染色过程中都需避免组织切片干燥,保持湿润; 

2.良好染色效果的获得很大程度上取决于标本制备和正确的实验方法,建议每批实验设置阴阳性对照; 

3.本试剂盒一抗稀释液不能用于 HRP 标记一抗或者二抗的稀释; 

4.DAB 工作液配制好后需避光保存,且最好在 30min 内用完; 

5.本说明书所提供的操作方法仅供参考,如遇特殊情况需要根据实际情况进行调整。

产品应用 :

DAB 工作液配制:在滴加 DAB 步骤前,将 DAB 原液与 DAB 稀释液按照 1:20 比例配制本次实验所需要的用量,混匀后避光备用。


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