标签和内参抗体

1、样本种属来源：

首先考虑实验样本来源于何物种。

a、哺乳动物的组织或者细胞样本，通常选择β- actin、β- tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3等。

b、其他稀少物种来源，可以参照文献指导或是选择高度保守管家基因表达的蛋白质相应的抗体作为内参。

2、目的蛋白分子量：

选择内参抗体时，应该考虑目的蛋白分子量的大小。通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5 kDa以上但勿差距太大。比如目的蛋白分子量为45 kDa，此时不适宜选择β-actin作为内参，可以考虑选择GAPDH或者β- tubulin作为内参。

3、目的蛋白表达部位：

针对一般蛋白质检测，GAPDH、β-actin或β-tubulin可以满足要求，而如果需要检测亚细胞器蛋白时，适宜选择对应亚细胞器内参更能体现内部参照的准确性。比如常用的核内参抗体有Lamin A、Lamin B、TBP、YY1、Histone H3。而对于膜蛋白检测，常用的内参抗体为ATP1A1。对于线粒体蛋白的检测，常用VDAC1和COX IV作为内参抗体。

以上原则仅针对通常情况，需要特别注意的是内参的选择还须考虑实际实验环境状况，比如某些细胞或组织由于缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达量增高，此种状况下GAPDH不适合做内参；在涉及细胞增殖相关实验中，c-Jun由于自身表达变化就不适合做内参；在凋亡实验中，TBP、Lamin B等不适合作为核内参。因此在设计实验方案时应考虑这些因素的影响并查询相关文献，如果在实验过程中出现内参表达出现异常状况应及时分析原因并调整内参选择。