同型对照
正常情况下，抗体会与特定的蛋白质或抗原结合；但有时抗体也会以非特异性的方式与其他蛋白质或细胞组分结合。设置实验对照是判断实验中使用的抗体是否存在非特异性结合的关键。
抗体脱靶或非特异性结合会导致假阳性结果，从而难以判断是非特异性的背景染色还是特异性的抗原着色。因此，设置适当的实验对照来确保结果的可靠性至关重要。
Jump to:
什么是同型对照?
同型对照是抗体染色应用中用作阴性对照的抗体。
同型对照采用与靶标一抗相同种属来源、相同亚型的免疫球蛋白，但对目标蛋白无特异性。
为什么要使用同型对照?
同型对照可以帮助区分实验中的抗体特异性着色和非特异性背景染色。抗体（有时还有偶联荧光标签或生物素标签的抗体）可以非特异性地与其他蛋白质、内源性酶、脂质和Fc受体结合。将同型对照作为阴性对照也可以确定方案中的封闭和/或清洗步骤是否充分。
如何选择最佳的同型对照?
同型对照应与一抗的一些特征相匹配:
-
同一种属
-
同一免疫球蛋白类型
-
同一免疫球蛋白亚类（对于某些种属）
-
与一抗相同的标签（生物素、HRP、荧光团等）
例如，如果您使用的一抗是与FITC结合的小鼠IgG2b抗体，那么您需要选择的也是与FITC结合的小鼠IgG2b同型对照抗体。
如果使用未结合的一抗和二级抗体进行检测，则同型对照应与一级抗体匹配，以确定是否存在一抗的非特异性染色。仅二抗（样本仅用二抗染色，未使用一抗）也可作为对照，以确定二抗的背景染色。
哪些应用可使用同型对照?
同型对照最常用于FC、IP和IHC，但也可用于WB、ELISA和IF/ICC等其他应用中的封闭和包被。
同型对照实验方案
同型对照抗体只是替代对照样品的一抗，方案的其余部分完全相同（减少实验变量带来的变化）。
应在与实验样品完全相同的条件下处理同型对照，包括使用的浓度，需要与一抗相同。
如果使用二抗，应使用相同的二抗对同型对照进行染色。
当使用同型对照时，您的数据应该类似于下面的示例。使用同型对照可以更容易地筛选出用Proteintech APC结合CD4抗体特异性染色的CD4+阳性细胞群。
 |
1X10^6 human peripheral blood lymphocytes were surface stained with 0.06 ug APC Mouse IgG2b Isotype Control (APC-65128, clone: MPC-11) (red) or 0.06 ug APC Anti-Human CD4 (APC-65134, clone: OKT4) (orange), or not stained (blank) (blue). Cells were not fixed. |
Proteintech同型对照产品
- 87种同型对照抗体
- APC、PE、FITC、FITC Plus、Atlantic Blue™、Cardinal Red™、CoraLite® Plus 405、CoraLite® Plus 488、CoraLite® Plus 555、CoraLite® Plus 647、CoraLite®594、CoraLite® Plus 750
- 可用物种：小鼠、大鼠、亚美尼亚仓鼠
常规同型对照抗体
| 名称 | 货号 | 应用 |
| Mouse IgG1 isotype control | 66360-1-Ig | WB ,FC ,ELISA |
| Mouse IgG2a isotype control | 66360-2-Ig | WB ,FC ,ELISA |
| Mouse IgG2b isotype control | 66360-3-Ig | WB ,FC ,ELISA |
| Mouse IgG3 isotype control | 66360-4-Ig | WB ,ELISA |