同型对照

正常情况下,抗体会与特定的蛋白质或抗原结合;但有时抗体也会以非特异性的方式与其他蛋白质或细胞组分结合。设置实验对照是判断实验中使用的抗体是否存在非特异性结合的关键。

抗体脱靶或非特异性结合会导致假阳性结果,从而难以判断是非特异性的背景染色还是特异性的抗原着色。因此,设置适当的实验对照来确保结果的可靠性至关重要。

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什么是同型对照?

同型对照是抗体染色应用中用作阴性对照的抗体。

同型对照采用与靶标一抗相同种属来源、相同亚型的免疫球蛋白,但对目标蛋白无特异性。

isotype control conjugated primary antibody

为什么要使用同型对照?

同型对照可以帮助区分实验中的抗体特异性着色和非特异性背景染色。抗体(有时还有偶联荧光标签或生物素标签的抗体)可以非特异性地与其他蛋白质、内源性酶、脂质和Fc受体结合。将同型对照作为阴性对照也可以确定方案中的封闭和/或清洗步骤是否充分。

如何选择最佳的同型对照?

同型对照应与一抗的一些特征相匹配:

  • 同一种属

  • 同一免疫球蛋白类型

  • 同一免疫球蛋白亚类(对于某些种属)

  • 与一抗相同的标签(生物素、HRP、荧光团等)

例如,如果您使用的一抗是与FITC结合的小鼠IgG2b抗体,那么您需要选择的也是与FITC结合的小鼠IgG2b同型对照抗体。

如果使用未结合的一抗和二级抗体进行检测,则同型对照应与一级抗体匹配,以确定是否存在一抗的非特异性染色。仅二抗(样本仅用二抗染色,未使用一抗)也可作为对照,以确定二抗的背景染色。

isotype control unconjugated primary antibody with secondary antibody

哪些应用可使用同型对照?

同型对照最常用于FC、IP和IHC,但也可用于WB、ELISA和IF/ICC等其他应用中的封闭和包被。

同型对照实验方案

同型对照抗体只是替代对照样品的一抗,方案的其余部分完全相同(减少实验变量带来的变化)。

应在与实验样品完全相同的条件下处理同型对照,包括使用的浓度,需要与一抗相同。

如果使用二抗,应使用相同的二抗对同型对照进行染色。

当使用同型对照时,您的数据应该类似于下面的示例。使用同型对照可以更容易地筛选出用Proteintech APC结合CD4抗体特异性染色的CD4+阳性细胞群。

Flow cytometry validation image. 1X10^6 human peripheral blood lymphocytes were surface stained with 0.06 ug APC Mouse IgG2b Isotype Control (APC-65128, clone: MPC-11) (red) or 0.06 ug APC Anti-Human CD4 (APC-65134, clone: OKT4) (orange), or not stained (blank) (blue). Cells were not fixed. 1X10^6 human peripheral blood lymphocytes were surface stained with 0.06 ug APC Mouse IgG2b Isotype Control (APC-65128, clone: MPC-11) (red) or 0.06 ug APC Anti-Human CD4 (APC-65134, clone: OKT4) (orange), or not stained (blank) (blue). Cells were not fixed.
Proteintech同型对照产品
  • 48种同型对照抗体
  • 可作为非偶联物或偶联物提供:APC、FITC、PE、CoraLite®488、CoraLite®594、CoraLite®647
  • 可用物种:小鼠、大鼠、亚美尼亚仓鼠
常规同型对照抗体
名称 货号 应用
Mouse IgG1 isotype control 66360-1-Ig WB ,FC ,ELISA
Mouse IgG2a isotype control 66360-2-Ig WB ,FC ,ELISA
Mouse IgG2b isotype control 66360-3-Ig WB ,FC ,ELISA
流式同型对照抗体
类型 同型对照抗体名称 货号
Mouse IgG1 FITC Mouse IgG1 Isotype Control FITC-65124
PE Mouse IgG1 Isotype Control PE-65124
APC Mouse IgG1 Isotype Control APC-65124
CoraLite®488-conjugated Mouse IgG1 Isotype Control CL488-65124
CoraLite®647-conjugated Mouse IgG1 Isotype Control CL647-65124
Mouse IgG1 Isotype Control 65124-1-Ig
CoraLite®488-conjugated Mouse IgG1 Isotype Control CL488-66360
CoraLite®594-conjugated Mouse IgG1 Isotype Control CL594-66360
CoraLite®647-conjugated Mouse IgG1 Isotype Control CL647-66360
Mouse IgG1 Isotype Control 66360-1-Ig
Mouse IgG2a FITC Mouse IgG2a Isotype Control FITC-65208
PE Mouse IgG2a Isotype Control PE-65208
APC Mouse IgG2a Isotype Control APC-65208
CoraLite®488-conjugated Mouse IgG2a Isotype Control CL488-65208
CoraLite®647-conjugated Mouse IgG2a Isotype Control CL647-65208
Mouse IgG2a Isotype Control 65208-1-Ig
CoraLite®647-conjugated Mouse IgG2a Isotype Control CL647-66360-2
Mouse IgG2a Isotype Control 66360-2-Ig
Mouse IgG2b FITC Mouse IgG2b Isotype Control FITC-65128
PE Mouse IgG2b Isotype Control PE-65128
APC Mouse IgG2b Isotype Control APC-65128
CoraLite®488-conjugated Mouse IgG2b Isotype Control CL488-65128
CoraLite®594-conjugated Mouse IgG2b Isotype Control CL594-65128
CoraLite®647-conjugated Mouse IgG2b Isotype Control CL647-65128
Mouse IgG2b Isotype Control 65128-1-Ig
CoraLite®488-conjugated Mouse IgG2b Isotype Control CL488-66360-3
CoraLite®594-conjugated Mouse IgG2b Isotype Control CL594-66360-3
CoraLite®647-conjugated Mouse IgG2b Isotype Control CL647-66360-3
Mouse IgG2b Isotype Control 66360-3-Ig
     
Rat IgG1 FITC Rat IgG1 Isotype Control FITC-65212
PE Rat IgG1 Isotype Control PE-65212
APC Rat IgG1 Isotype Control APC-65212
CoraLite®488-conjugated Rat IgG1 Isotype Control CL488-65212
CoraLite®647-conjugated Rat IgG1 Isotype Control CL647-65212
Rat IgG1 Isotype Control 65212-1-Ig
Rat IgG2a FITC Rat IgG2a Isotype Control FITC-65209
PE Rat IgG2a Isotype Control PE-65209
APC Rat IgG2a Isotype Control APC-65209
CoraLite®488-conjugated Rat IgG2a Isotype Control CL488-65209
CoraLite®647-conjugated Rat IgG2a Isotype Control CL647-65209
Rat IgG2a Isotype Control 65209-1-Ig
Rat IgG2b FITC Rat IgG2b Isotype Control FITC-65211
PE Rat IgG2b Isotype Control PE-65211
APC Rat IgG2b Isotype Control APC-65211
CoraLite®488-conjugated Rat IgG2b Isotype Control CL488-65211
CoraLite®647-conjugated Rat IgG2b Isotype Control CL647-65211
Rat IgG2b Isotype Control 65211-1-Ig
     
Hamster IgG FITC Armenian Hamster IgG Isotype Control FITC-65210
PE Armenian Hamster IgG Isotype Control PE-65210
APC Armenian Hamster IgG Isotype Control APC-65210
CoraLite®488-conjugated Armenian Hamster IgG Isotype Control CL488-65210
CoraLite®647-conjugated Armenian Hamster IgG Isotype Control CL647-65210
Armenian Hamster IgG Isotype Control 65210-1-Ig
     
Rabbit IgG Rabbit IgG control Polyclonal antibody 30000-0-AP
CoraLite®488-conjugated Rabbit IgG control Polyclonal antibody CL488-30000
CoraLite®647-conjugated Rabbit IgG control Polyclonal antibody CL647-30000
FITC-conjugated Rabbit IgG control Polyclonal antibody FITC-30000

其他对照抗体

类型 产品名称 货号
对照抗体 Rabbit anti-Human IgG B900110
Rabbit anti-Mouse IgG B900120
Goat anti-Rabbit IgG B900210
Goat anti-Human IgG B900220
Rabbit IgG B900610
Mouse IgG B900620
Goat IgG B900630
对照血清 Rabbit anti-Goat IgG serum B900710
Goat anti-Human IgG serum B900720
Rabbit Serum B900760
Goat serum B900780