活细胞成像

活细胞成像是一种使用时差显微镜(time-lapse microscopy)观察细胞动态变化的技术。该技术可以实时观察细胞结构变化和生理过程。其他常见的显微镜技术(如免疫荧光)通常需要细胞固定和透化,这仅能展示细胞在某个时间点的状态,可能出现假象。相反,在活细胞成像期间,可以分析细胞动态变化,特别是亚细胞结构的活动。

用于活细胞成像的探针包括荧光蛋白、多肽、有机和无机荧光团(量子点)。显然,对于活细胞成像而言,在加入荧光探针后不影响细胞的存活和正常生理活动是至关重要的。对于荧光标记的蛋白质和多肽等大分子,这仍然是一个挑战。 ChromoTek通过Chromobody®技术克服了这个问题:Chromobody是与荧光蛋白(GFP或RFP)基因融合并在细胞内表达的纳米抗体。它们适用于从植物到脊椎动物的多种真核细胞。在活细胞内,纳米抗体能够与其靶蛋白结合,从而达到荧光标记靶蛋白的目的。Chromobodies质粒可以瞬转细胞,也可以构建稳定表达的细胞株甚至组成型表达的转基因生物体。

Nuclear Actin-Chromobody: NIH 3T3 cells (murine fibroblasts) transfected with the nuclear Actin-Chromobody (TagGFP2, green) and the Lamin-Chromobody (TagRFP, red) were starved in serum-free medium for 24 hours. Nuclear Actin-Chromobody probed endogenous F-actin assembly and distribution is shown 30 s after stimulation with serum. Courtesy of Matthias Plessner.

The time lapse video shows reorganization of actin filaments after treatment with Cytochalasin. For details see Actin-Chromobody.