抗兔免疫组化检测试剂盒

Cat No : PK10009



产品介绍

该免疫组化检测试剂盒利用最新的聚合技术将多个过氧化物酶(HRP)分子及抗兔免疫球蛋白二抗偶联到多聚物上,形成的聚合物(二抗)具有放大信号增加敏感度、减少非特异性背景特点。与兔源一抗进行搭配使用,结合后再与DAB反应,可得棕色显色。该反应体系不含生物素和链霉亲和素,不受内源性生物素影响,背景极低;只需要二步反应,即可完成实验过程。同时本试剂盒配有一抗稀释液,可保证抗体的活性和稳定性,减少非特异性结合,降低非特异性背景染色。

组份\规格

1mL

6mL18mL

55mL

110mL

山羊抗兔HRP标记聚合物

1mL

6mL

18mL

55mL

110mL

DAB原液20×

75μL

400μL

1mL

3mL

3mL x 2

DAB 稀释液

1.5mL

8mL

20mL

60mL

120mL

一抗稀释液

4mL

24mL

72mL

220mL

440mL


保存条件

该试剂盒应在4℃保存,并在有效期(一年)内使用,切勿冻融。

使用方法

(以石蜡切片染色程序为例)

1) 将石蜡切片脱蜡至水:先将切片置于二甲苯中20分钟,2次。然后依次在100%,95%,80%和60%乙醇,每级放置5分钟。再用蒸馏水浸洗3次,每次1分钟。

2) 抗原修复:根据抗原抗体情况,必要时对切片进行抗原热修复:加入柠檬酸修复液(货号:PR30001)或Tris-EDTA修复液(货号:PR30002后,将切片放置微波炉,中火修复2次,每次5分钟。结束后在修复液中自然冷却。然后用蒸馏水冲洗3次,每次1分钟。

3) 灭活:加入3% H2O2(蒸馏水稀释),室温10 分钟以灭活内源性过氧化物酶。TBS冲洗3次,每次1分钟。

4) 封闭:用TBS制备5%封闭血清(如无合适血清,可用PBS(或TBS)制备3-5% BSA),室温 1小时。注意血清来源种属要与二抗来源种属一致(此试剂盒二抗来源于山羊,需用山羊血清)。

5) 孵育一抗:滴加适当一抗稀释液稀释一抗(兔一抗),室温孵育1~2 小时或者4度过夜孵育。TBS冲洗3次,每次1分钟。

6) 孵育二抗:滴加50-100μL抗兔HRP标记聚合物,室温孵育30 分钟。反应结束后用TBS冲洗3次,每次1分钟。

7) DAB显色:事先将DAB原液与DAB稀释液按照1:50比例配制本次实验所需要的用量,混匀后避光备用。

滴加配制好的显色剂DAB工作液50-100μL,室温孵育5-10分钟, 或者镜下控制反应时间。蒸馏水洗涤。

8) 苏木素复染2-3分钟,然后蒸馏水冲洗。

9) 各级酒精(60-100%)脱水,每级5分钟。取出后置于二甲苯5分钟,2次。用封片胶封片、显微镜观察。

注意

1.在抗原修复及后续免疫组化染色过程中都需避免组织切片干燥,保持湿润;

2.良好染色效果的获得很大程度上取决于标本制备和正确的实验方法,建议每批实验设置阴阳性对照;

3.本试剂盒一抗稀释液不能用于HRP标记一抗或者二抗的稀释;

4.DAB工作液配制好后需避光保存,且最好在30min内用完;

5.本说明书所提供的操作方法仅供参考,如遇特殊情况需要根据实际情况进行调整。

Publications

ApplicationTitle

Bioengineered

Rapamycin ameliorates chronic intermittent hypoxia and sleep deprivation-induced renal damage via the mammalian target of rapamycin (mTOR)/NOD-like receptor protein 3 (NLRP3) signaling pathway.

Authors - Wei Liu

Front Immunol

Direct Inhibition of GSDMD by PEITC Reduces Hepatocyte Pyroptosis and Alleviates Acute Liver Injury in Mice.

Authors - Jie Wang