Co-IP裂解液

Product Information

Proteintech开发的Co-IP裂解液是一款较温和的裂解液，可用于从细胞、组织中制备非变性蛋白裂解物。特别推荐用于免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）实验，亦可用于ELISA、WB、IP等实验。本产品主要成分为Tris (pH 7.4)，NaCl，Triton X-100，不含其它酶抑制剂，所以制备的裂解物还可应用于某些特定的酶切实验（如λ phosphatase treated等）。

产品介绍

保存条件

4℃保存，一年有效。

使用方法

裂解样品以应用于后续Co-IP实验为例

取适当量的裂解液，使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂混合液（货号：PR20032 / PR20016），用于磷酸化相关检测需要添加磷酸酶抑制剂混合液（货号：PR20015）。

a. 对于细胞样品

悬浮细胞：

（1）直接转移至收集管中，4℃，500 g离心5 min，弃上清。

（2）预冷PBS重悬，离心洗涤2次（每次4℃，500 g离心5 min），弃上清。

（3）然后按1000万个细胞加入1 mL预冷的裂解液，枪头吹打数次混匀，冰上裂解15 min。

（4）4℃，10000 g离心5 min，取上清用于后续Co-IP实验。

贴壁细胞：

（1）弃培养基，加预冷PBS并用细胞刮刮下细胞至收集管，4℃，500 g离心5 min，弃上清。

（2）再加预冷PBS重悬，离心洗涤1次（每次4℃，500 g离心5 min），弃上清。

（3）然后按1000万个细胞加入1 mL预冷的裂解液，枪头吹打数次混匀，冰上裂解15 min。

（4）4℃，10000 g离心5 min，取上清用于后续Co-IP实验。

b. 对于动物组织样品

（1）称重、剪碎、预冷PBS洗涤后，洁净滤纸吸干水分。

（2）冰浴玻璃匀浆：按100 mg组织加入1 mL预冷的裂解液，转至合适大小的玻璃匀浆器，冰浴匀浆30-50次至充分裂解。

注意：此步亦可研钵中液氮研磨至粉末状，按上述比例加入含酶抑制剂的裂解液。

（3）转移至离心管，冰上裂解15 min。

鉴定方法：取20 uL匀浆30次后的组织样品加入等体积的0.4%台盼蓝溶液，混匀，在显微镜下观察台盼蓝溶液染色阳性（蓝色）细胞数目的比例，当阳性（蓝色）细胞破碎达到100%即说明裂解充分。 若阳性（蓝色）细胞比例未达到100%，适当增加匀浆次数，随后按照同样的方法使用台盼蓝溶液进行鉴定。

（4）4℃，10000 g离心5 min，取上清用于后续Co-IP实验。

c. 对于植物、细菌等其它类型样本：具体步骤，请参照文献或资料中，特定样本相应的通用操作进行。

注意

1. 需自备蛋白酶抑制剂混合液（货号：PR20032 / PR20016）和磷酸酶抑制剂混合液（货号:  PR20015）。

2. 不同的样品之间蛋白含量存在差异，可根据实际样品调整加入的裂解液体积。

3. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。

4. 提取得到的总蛋白可以使用Proteintech的BCA蛋白浓度检测试剂盒（货号：PK10026）测定蛋白浓度，不适用Bradford法测蛋白浓度。

5. 超声和冻融都可能对蛋白之间的互作造成一定破坏，所以用于Co-IP实验的裂解物应尽量避免超声和冻融。但某些样本加入裂解液后变得特别粘稠时，可以轻微短暂超声（如150 w超声2 s/停2 s，重复3-5次）。离心后的上清裂解物，最好立即用于Co-IP实验，如无法当天使用， 至少应分装成小份冻存，避免反复冻融。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

7. 本产品仅用于科研，不得用于临床诊断或治疗。

附录1：Proteintech各种裂解液的特点

附录2：Proteintech各种裂解液的选择