Co-IP裂解液

Cat No : PR20037

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产品介绍

Proteintech开发的Co-IP裂解液是一款较温和的裂解液,可用于从细胞、组织中制备非变性蛋白裂解物。特别推荐用于免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)实验,亦可用于ELISA、WB、IP等实验。本产品主要成分为Tris (pH 7.4),NaCl,Triton X-100,不含其它酶抑制剂,所以制备的裂解物还可应用于某些特定的酶切实验(如λ phosphatase treated等)。


组分 液体
Co-IP裂解液 50 mL/100 mL


保存条件

4℃保存,一年有效。


使用方法

裂解样品以应用于后续Co-IP实验为例

取适当量的裂解液,使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂混合液(货号:PR20032 / PR20016),用于磷酸化相关检测需要添加磷酸酶抑制剂混合液(货号:PR20015)。

a. 对于细胞样品

悬浮细胞:

(1)直接转移至收集管中,4℃,500 g离心5 min,弃上清。

(2)预冷PBS重悬,离心洗涤2次(每次4℃,500 g离心5 min),弃上清。

(3)然后按1000万个细胞加入1 mL预冷的裂解液,枪头吹打数次混匀,冰上裂解15 min。

(4)4℃,10000 g离心5 min,取上清用于后续Co-IP实验。

贴壁细胞:

(1)弃培养基,加预冷PBS并用细胞刮刮下细胞至收集管,4℃,500 g离心5 min,弃上清。

(2)再加预冷PBS重悬,离心洗涤1次(每次4℃,500 g离心5 min),弃上清。

(3)然后按1000万个细胞加入1 mL预冷的裂解液,枪头吹打数次混匀,冰上裂解15 min。

(4)4℃,10000 g离心5 min,取上清用于后续Co-IP实验。

b. 对于动物组织样品

(1)称重、剪碎、预冷PBS洗涤后,洁净滤纸吸干水分。

(2)冰浴玻璃匀浆:按100 mg组织加入1 mL预冷的裂解液,转至合适大小的玻璃匀浆器,冰浴匀浆30-50次至充分裂解。

注意:此步亦可研钵中液氮研磨至粉末状,按上述比例加入含酶抑制剂的裂解液。

(3)转移至离心管,冰上裂解15 min。

鉴定方法:取20 uL匀浆30次后的组织样品加入等体积的0.4%台盼蓝溶液,混匀,在显微镜下观察台盼蓝溶液染色阳性(蓝色)细胞数目的比例,当阳性(蓝色)细胞破碎达到100%即说明裂解充分。 若阳性(蓝色)细胞比例未达到100%,适当增加匀浆次数,随后按照同样的方法使用台盼蓝溶液进行鉴定。

(4)4℃,10000 g离心5 min,取上清用于后续Co-IP实验。

c. 对于植物、细菌等其它类型样本:具体步骤,请参照文献或资料中,特定样本相应的通用操作进行。



注意

1. 需自备蛋白酶抑制剂混合液(货号:PR20032 / PR20016)和磷酸酶抑制剂混合液(货号:  PR20015)。

2. 不同的样品之间蛋白含量存在差异,可根据实际样品调整加入的裂解液体积。

3. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。

4. 提取得到的总蛋白可以使用Proteintech的BCA蛋白浓度检测试剂盒(货号:PK10026)测定蛋白浓度,不适用Bradford法测蛋白浓度。

5. 超声和冻融都可能对蛋白之间的互作造成一定破坏,所以用于Co-IP实验的裂解物应尽量避免超声和冻融。但某些样本加入裂解液后变得特别粘稠时,可以轻微短暂超声(如150 w超声2 s/停2 s,重复3-5次)。离心后的上清裂解物,最好立即用于Co-IP实验,如无法当天使用, 至少应分装成小份冻存,避免反复冻融。

6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

7. 本产品仅用于科研,不得用于临床诊断或治疗。


附录1:Proteintech各种裂解液的特点

附录1:Proteintech各种裂解液的特点.jpg

附录2:Proteintech各种裂解液的选择

裂解液选择2.jpg

Publications

ApplicationTitle
CoIP

J Mol Cell Cardiol

Targeting heat shock protein 47 alleviated doxorubicin-induced cardiotoxicity and remodeling in mice through suppression of the NLRP3 inflammasome

Authors - Wenke Shi