普通ECL化学发光检测试剂盒
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Cat No : PK10001
Validation Data Gallery
产品介绍
Proteintech 研发的普通ECL 化学发光检测试剂盒是免疫印迹实验中与辣根过氧化物酶（HRP）配套使用的底物检测试剂盒。本产品能够在HRP 的催化下发生化学反应而发光，可用于检测固定在膜上的蛋白质等生物大分子，其高灵敏度能够检测ng 级别的抗原，发光信号强烈持久，可以使用照相技术（X-光胶片曝光）或者其他成像方法（如荧光或化学发光成像仪）进行检测。
组分 | 100 mL | 200 mL | 500 mL |
A液 | 50 mL | 100 mL | 250 mL |
| B液 | 50 mL | 100 mL | 250 mL |
保存条件
4℃避光保存，一年有效。
使用方法
1. Western 二抗孵育后，印迹膜经过数次充分洗涤后，用平头镊将膜取出，用吸水纸略吸去过多的液体（切勿接触膜的蛋白质），然后置于一洁净器皿内或是保鲜膜上。
2. 根据印迹膜大小，将A 液与B 液等体积混合，配制为发光检测底物工作液（使用量约为每 10 cm2 膜 1 mL 或者根据个人实验习惯使用）。滴加发光底物工作液到印迹膜上，确保工作液均匀覆盖在膜上，放置1-2 分钟。
3. 取膜，弃发光底物工作液，用吸水纸略吸去过多的液体，将膜放置于两片洁净保鲜膜中间，此过程应小心完成，避免膜与膜之间产生气泡。随后进行压片检测或是荧光成像仪检测。
4. 压片检测：将膜固定于片夹内，暗室内压片1 分钟，立即显影定影，根据结果再调整压片时间。或直接分别压片30秒、1、3、5 分钟，然后一起显影定影观察结果。
5. 荧光成像仪检测：将膜放置到荧光成像仪内，参照仪器说明书进行检测。
注意
1. 为获得最佳实验结果，请务必优化实验条件，包括检测样品的用量、一抗和二抗稀释度、杂交膜及封闭试剂的选择。
2. 务必使用推荐的抗体稀释浓度以获得阳性结果，最佳抗原和抗体用量须通过预实验来确定。
3. 由于奶粉中含有内源性生物素，在使用亲和素/生物素系统时，封闭液中应避免使用奶粉。
4. 由于叠氮钠是HRP 抑制剂，在缓冲液中应避免使用叠氮钠作为防腐剂。
5. 在与膜发生接触过程中，请佩戴手套且使用干净镊子等洁净器材，避免蛋白污染及高背景。
6. A 液和B 液在吸取过程中必须要更换枪头，A 液和B 液相互污染后会导致A 液或B 液逐渐失效，影响后续的使用效果。A 液与B 液混合后须尽快使用，放置过久会影响灵敏度。
7. 各溶液使用后，请盖紧瓶盖避光保存，以防失效。特别是B 液，含有氧化剂，比较容易被还原而失效。
8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
问题解答：
| 问题 | 可能原因 | 解决方法 |
高背景（背景高或无特异性蛋白带） | 一抗的稀释没有使用正确的缓冲液和正确的浓度 | 使用推荐的封闭液和 TBS/T 稀释抗体并 4℃孵育过夜 |
| 化学发光检测时没有使用相应的膜 | 使用高质量的 NC 膜或 PVDF 膜 | |
膜封闭不足导致一抗或二抗产生大量的非特异性结合 | 用含 5％脱脂奶粉的 TBS/T 在室温封闭 1-2 小时 | |
二抗的稀释没有使用正确的缓冲液和正确的浓度，或二抗的特异性差 | 一些二抗会与蛋白产生非特异性的结合。因此在检测中可加入一步二抗的对照试验，在没有一抗的情况下，直接加入二抗孵育。也可将二抗用含 5％脱脂奶粉的 TBS/T 在室温下孵育 1 小时 | |
| 配制试剂的用水水质不佳 | 在配制试剂时（尤其是磷酸化抗体）使用 Milli-Q 或其它超纯的去离子水 | |
信号弱（检测不到信号） | 一抗孵育不足 | 适当延长孵育时间（4℃孵育过夜） |
转膜不完全 | 转膜时采用更高的电压和更长的时间。也可采用预染的蛋白 Marker 监控转膜的过程 | |
封闭膜超时 | 缩短封闭膜的时间 | |
蛋白的表达水平低于检测底限 | 在每孔中加入更多的蛋白； 采用免疫沉淀法富集蛋白； 换用表达高的样本或细胞； 检测前适当刺激蛋白的表达 | |
二抗与一抗的结合率太低 | 提高二抗的浓度或换用与一抗匹配的二抗 | |
配制试剂时发生交叉污染 | 重新配制各种试剂 |
Publications
| Application | Title |
|---|---|
Nat Microbiol HIV-2/SIV Vpx targets a novel functional domain of STING to selectively inhibit cGAS-STING-mediated NF-κB signalling. | |
Adv Sci (Weinh) Hypotonic Stress Induces Fast, Reversible Degradation of the Vimentin Cytoskeleton via Intracellular Calcium Release. | |
ACS Nano Engineering Programmed Death Ligand-1/Cytotoxic T-Lymphocyte-Associated Antigen-4 Dual-Targeting Nanovesicles for Immunosuppressive Therapy in Transplantation. | |
Nat Commun Assembling custom side chains on proteoglycans to interrogate their function in living cells. | |
Toxicology PM2.5 induces the abnormal lipid metabolism and leads to atherosclerosis via Notch signaling pathway in rats | |
Acta Biomater Cellular membrane-based vesicles displaying a reconstructed B cell maturation antigen for multiple myeloma therapy by dual targeting APRIL and BAFF. |