HAT完全培养基

Cat No : PR40011



产品介绍

本产品是含有HAT(次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷)以及杂交瘤生长所需要的细胞因子的完全培养基,适用于大鼠、小鼠及仓鼠物种单克隆抗体制备过程中的杂交瘤细胞的筛选和初级培养。本产品含杂交瘤生长所需的细胞因子,因此使用中无需饲养层细胞。

每升本产品详细成分为

DMEM基础培养基:80%(体积比)

牛血清:15%(体积比)

青霉素:100000 U

链霉素:100000 U

次黄嘌呤(Hypoxanthine):0.0001 mol

胸腺嘧啶核苷(Thymidine):0.000016 mol

氨基蝶呤(Aminopterin):0.0000004 mol

细胞因子:足量

保存条件

-20℃避光保存,保质期1年。

解冻开盖使用后需将剩余的部份及时放回-20℃保存。本品可以冻融数次,但建议不超过5次,以免细胞因子失效。

使用方法

  1. 本产品为无菌的工作液,室温或37℃放置至完全融化后摇匀使用。融化后如有少量晶片状或絮状不溶物属正常现象,请勿去除。

  2. 离心收集融合的杂交瘤细胞,弃去含残留PEG的上清后,用本产品将细胞重悬至合适密度(通常按一个小鼠或仓鼠脾脏融合后铺10板左右,大鼠铺20-30板左右),再将细胞滴加到96孔细胞培养板中(200μL/孔左右),5% CO2培养箱37℃培养3天后半量换液,再过两天后全换液,融合后7-10天左右即可得到初始的杂交瘤细胞克隆。

注意

1. 本产品有一定毒性,仅用于杂交瘤细胞的筛选及培养,不可用于培养活体动物、诊断或治疗药物用。

2. 本产品适用于HGPRT筛选系统的杂交瘤细胞的筛选培养,不适用于TK或其它选择系统的细胞培养。本品不能用于直接培养HGPRT缺陷细胞(如NS1, SP2/0, FO等)。

3. 本产品为无菌溶液,pH为7.2~7.4,取用需在无菌条件下进行。

4. 初始的杂交瘤细胞对营养需求较高,培养3天后用本产品半换液,再过两天后用本产品全换液,再间隔一天或两天后即可进行克隆的初步筛选检测。

5. 使用本产品筛选培养杂交瘤细胞的过程中,HGRPT缺陷的fusion partner在压力筛选下2-3天死亡,未参与融合的脾细胞大多在3-7天内死亡,因此培养中有大量细胞死亡属于正常现象,培养中半量换液可以减少细胞碎片。

6. 本产品解冻开盖后,可以按使用量分装保存。使用后需将剩余的部份及时放回-20℃保存。本品可以冻融数次,但建议不超过5次,以免细胞因子失效。