小鼠单克隆抗体亚型鉴定试剂盒(含 IgA 特异性抗体)

Cat No : PK20003



产品介绍

Catalog No.   PK200032*96孔5*96孔

酶标板(Microplate) 预包被了针对小鼠 IgG1IgG2aIgG2bIgG3IgAIgM

kappa light chainlambda light chain 的特异性抗体

2 5
封板膜(Plate Cover seals)2 5
20×PBST15 mL20 mL×2
100×羊抗鼠 IgA+IgM+IgG-HRP (Goat Anti-Mouse IgA+IgM+IgG-HRP)120 μL300 μL
显色液 (TMB Substrate) A 240 μL600 μL
显色液 (TMB Substrate) B 24 mL30 mL×2
终止液 (Stop Solution)24 mL30 mL×2


保存条件

该试剂盒在低温下运输,在未开封情况下,4°C保存6个月 或者 -20°C保存12个月,开封之后,1周内用完。

使用方法

1. 材料准备

从 4°C 中取出 Mouse 单克隆抗体亚型鉴定试剂盒,室温条件下平衡 30 分钟。 

a. 1×PBST : 10 mL 20×PBST + 190 mL 超纯水 

b. 酶标板条 : 根据样本数量选取酶标板条数(测定 1 样本需要 1 酶标板条),余下板条置于密封 袋中,4°C 保存。 

c. 1×IgA+IgM+IgG-HRP : 10 μL 100×羊抗鼠 IgA+IgM+IgG-HRP + 990 μL 1×PBST 


2. 样本准备 

a. 杂交瘤细胞上清 : 将样本以 1×PBST 1:100 稀释,例如 10 μL 杂交瘤细胞上清 + 990 μL 1×PBST。推荐稀 释范围为 1:20-1:200。 

b. 腹水 : 将样本以 1×PBST 1:100000 稀释,例如 1 μL 腹水 + 1 mL 1×PBST1:1000),再取上 述混合液 5 μL + 495  μL 1×PBST。推荐稀释范围为 1:50000-1:200000 

c. 纯化抗体 : 将样本以 1×PBST 稀释至 200 ng/mL,推荐稀释浓度为 20 ng/mL-1 μg/mL 


3. 单克隆抗体亚型鉴定 

a. 将待测样本适当稀释加入板条样品孔中,50 μL/孔。 

b. 无需孵育,将 1×羊抗鼠 IgA+IgM+IgG-HRP 加入样品孔中,50 μL/孔。混匀器上轻轻混匀,也可用手轻轻敲击板架两侧 1 min

c. 盖上封板膜,室温孵育 1 h 

d. 弃去孔内液体,1×PBST 洗板 3 次,吸水纸上拍干。 

e. 将现配的显色液加入孔中,100 μL/孔。 

注:显色液配方,A 液:B =1:100,即 10μL A 液与 1 mL B 液混合,混匀后立即使用。 

f. 室温避光显色 10-20 min。每孔加入终止液,100 μL/孔。 

g. 结果判读。结果可以对照下图以肉眼判定,也可以通过酶标仪读取 OD450。颜色最深或是 OD 值最高孔对应的即为相应亚型。 

注:每个样本应该在 A-F 中有一个阳性孔(即是样本重链类型),G H 中有一个阳性孔(即是样本轻链类型)。

image.png

注意

1. 显色液应临用前配制,即配即用。显色液 A 液应避光保存。 

2. 余下板条应密封保存。如短期不用,可置于-20°C 保存。

常见问题及解答:

常见问题            可能原因            解决方案            
多种重链结果             腹水中有杂抗体             将腹水样本至少 1:100000 稀释            
 样本中抗体浓度过高             再将样本 1:2-1:10 稀释            
 杂交瘤细胞中含有多种细胞系             亚克隆杂交瘤细胞            
  显色较慢或颜色较弱            样本中抗体浓度低             减少稀释倍数;延长显色时间            
结果难以判定             多种重链或轻链结果             再将样本 1:4 或 1:8 稀释后重新检测            

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