RIPA裂解液

Cat No : PR20001



产品介绍

Proteintech研制的 RIPA 裂解液是一种适用于细胞和组织的快速裂解液,裂解得到的蛋白样品可以用于 Western Blot、IP 等实验。RIPA 裂解液主要成分为 50mM Tris (pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X100,0.5% sodium deoxycholate,0.1% SDS,sodium fluoride,EDTA·Na2

组分50mL
裂解液液体

保存条件

4℃保存,一年有效。

使用方法

对于培养细胞样品: 

1. 取适当量的裂解液,使用前数分钟内加入protease inhibitor cocktail(货号:PR20032 / PR20016),用于磷酸化相关检测需要添加 phosphotase inhibitor cocktail(货号:PR20015)。

2. 对于贴壁细胞:先用细胞刮收集细胞,连同培养液一起,在 4℃条件下 500g 离心5分钟(最大转速不超过1000g),取沉淀,用预冷的 PBS 洗涤两次,在4℃条件下 500g 离心5分钟,倒掉上清。

3. 对于悬浮细胞:收集细胞,在 4℃条件下 500g离心 5 分钟(最大转速不超过 1000g),用手指把细胞用力弹散。 

4. 按每 106细胞中加入 100μL 裂解液的比例加入适量的裂解液。细胞中因蛋白质含量不同,加入的裂解液比例可以适当调整。冰上放置 30 min,期间每 10 min 上下颠倒混匀。充分裂解后应没明显的细胞沉淀。

对于组织样品: 

1. 融解 RIPA 裂解液,混匀。取适当量的裂解液,使用前数分钟内加入protease inhibitor cocktail,用于磷酸化相关检测需要添加 phosphotase inhibitor cocktail 。

2. 将组织快速剪切成细小的碎片。 

3. 按每 20mg组织加入 100μL-200μL裂解液的比例加入裂解液 。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。

4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

注意

1. 需自备 protease inhibitor cocktail(货号:PR20032 / PR20016)和 phosphotase inhibitor cocktail(货号:PR20015)。

2. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。 

3. 由于含有较高浓度的去垢剂,不能用 Bradford 法来测定由本产品裂解所获得样品的蛋白浓度。 

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

5. RIPA 裂解液的裂解产物中会出现一小团透明胶状物,为含有基因组 DNA 等的复合物。在低温的条件下,用超声处理打碎打断该透明胶状物,随后10000转离心取上清用于后续实验。

Publications

ApplicationTitle

Acta Histochem

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