CCK-8试剂盒

使用方法

1.制作标准曲线（测定细胞具体数量时） 

1）先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。 

2）按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 3-5 个细胞浓度梯度，每组 3-6 个复孔。 

3）接种后培养 2-4 h 使细胞贴壁，然后加 CCK-8 试剂培养一定时间后测定 OD 值，制作出一条以细胞数量为横坐标，OD值为纵坐标的标准曲线，根据此标准线可以测定未知样品的细胞数量（使用此标准曲线的前提条件是实验条件一致，便于确定细胞的接种数量以及加入 CCK-8 后的培养时间）。 

2.细胞活性检测 

1）在 96 孔板中接种细胞悬液（100 uL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（37 ℃, 5% CO₂ ）。 

2）向每孔加入 10 uL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成气泡， 它们会影响 OD 值的读数）。 

3）将培养板在培养箱内孵育 1-4 h。 

4）用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。 

5）若暂时不测定 OD 值，可以向每孔中加入 10 uL 0.1 M 的HCl溶液或者1% w/v SDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24 h 内测定，吸光度不会发生变化。 

3.细胞增殖毒性检测 

1）在 96 孔板中配置 100 uL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 h （37 ℃，5% CO₂ ）。 

2）向培养板加入 1-10 uL 不同浓度的待测物质。 

3）将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24 或 48 h）。 

4）向每孔加入 10 uL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数）。 

5）将培养板在培养箱内孵育 1-4 h。 

6）用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。 

7）若暂时不测定 OD 值，可以向每孔中加入 10 uL 0.1 M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24 h 内测定，吸光度不会发生变化。 

注：如果待测物质有氧化性或还原性，可在加 CCK-8 之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。若药物影响比较小，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。