抗兔免疫组化检测试剂盒
Cat No : PK10009
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产品介绍
该免疫组化检测试剂盒利用最新的聚合技术将多个过氧化物酶（HRP）分子及抗兔免疫球蛋白二抗偶联到多聚物上，形成的聚合物（二抗）具有放大信号增加敏感度、减少非特异性背景特点。与兔源一抗进行搭配使用，结合后再与DAB反应，可得棕色显色。该反应体系不含生物素和链霉亲和素，不受内源性生物素影响，背景极低；只需要二步反应，即可完成实验过程。同时本试剂盒配有一抗稀释液，可保证抗体的活性和稳定性，减少非特异性结合，降低非特异性背景染色。
注意：如果需要抗原修复液、复染试剂和封片剂，请参阅我们的兔一抗自主全应用免疫组化试剂盒（货号：PK10017）。
组分/规格 | 1 mL | 6 mL | 18 mL | 55 mL | 110 mL |
山羊抗兔 HRP 标记聚合物 | 1 mL | 6 mL | 18 mL | 55 mL | 110 mL |
DAB 原液 20× | 75 uL | 400 uL | 1 mL | 3 mL | 3 mL x 2 |
DAB 稀释液 | 1.5 mL | 8 mL | 20 mL | 60 mL | 120 mL |
一抗稀释液 | 4 mL | 24 mL | 72 mL | 220 mL | 440 mL |
3% H2O2 | 1 mL | 6 mL | 18 mL | 55 mL | 110 mL |
保存条件
该试剂盒应在4℃保存，并在有效期（一年）内使用，切勿冻融。
使用方法
（以石蜡切片染色程序为例）
1) 将石蜡切片脱蜡至水：先将切片置于二甲苯中20分钟，2次。然后依次在100%，95%，80%和60%乙醇，每级放置5分钟。再用蒸馏水浸洗3次，每次1分钟。
2) 抗原修复：根据抗原抗体情况，必要时对切片进行抗原热修复：加入柠檬酸修复液（货号：PR30001）或Tris-EDTA修复液（货号：PR30002）后，将切片放置微波炉，中火修复2次，每次5分钟。结束后在修复液中自然冷却。然后用蒸馏水冲洗3次，每次1分钟。
3) 灭活（可选）：根据我们的经验，大多数情况下不需要对内源性过氧化物酶灭活，灭活有时甚至会对染色产生不利影响。然而该步骤在文献中有广泛提及，因此我们依然在该试剂盒中提供了内源性过氧化物酶灭活试剂。
3.1 用 1x 洗涤缓冲液清洗载玻片。沥去载玻片上的液体，并用吸水纸吸干组织切片周围残留的液体（使载玻片玻璃面尽可能干燥）。使用疏水性免疫组化笔（货号：PR30013）在组织切片周围的载玻片上画一个圆圈（可选）。
3.2 取 30-80 uL（依据组织大小）即用型3% H2O2涂在载玻片上，覆盖整个组织。将载玻片在室温下放置 10 分钟。阻断完成后用 1x 洗涤缓冲液清洗载玻片。
4) 封闭：在室温下用封闭缓冲液（例如 3% BSA）封闭组织 30 分钟。沥去载玻片上的液体，并用吸水纸吸干组织切片周围残留的液体。
* 试剂盒中的一抗稀释液也可用作封闭缓冲液的替代品。
5) 孵育一抗：滴加适当一抗稀释液稀释一抗（兔一抗），室温孵育1~2 小时或者4度过夜孵育。TBS冲洗3次，每次1分钟。
6) 孵育二抗：滴加50-100 uL抗兔HRP标记聚合物，室温孵育30 分钟。反应结束后用TBS冲洗3次，每次1分钟。
7) DAB显色：事先将DAB原液与DAB稀释液按照1：20比例配制本次实验所需要的用量，混匀后避光备用。
滴加配制好的显色剂DAB工作液50-100 uL，室温孵育5-10分钟, 或者镜下控制反应时间。蒸馏水洗涤。
8) 显色后可以使用0.5%CuSO4水溶液浸泡5分钟以增强信号对比度（可选）。
9) 苏木素复染2-3分钟，然后蒸馏水冲洗。
10) 各级酒精（60-100%）脱水,每级5分钟。取出后置于二甲苯5分钟，2次。用封片胶封片、显微镜观察。
注意
1.在抗原修复及后续免疫组化染色过程中都需避免组织切片干燥，保持湿润；
2.良好染色效果的获得很大程度上取决于标本制备和正确的实验方法，建议每批实验设置阴阳性对照；
3.本试剂盒一抗稀释液不能用于HRP标记一抗或者二抗的稀释；
4.DAB工作液配制好后需避光保存，且最好在30min内用完；
5.本说明书所提供的操作方法仅供参考，如遇特殊情况需要根据实际情况进行调整。
Publications
| Application | Title |
|---|---|
Chem Biol Interact Targeting PKM2 improves the gemcitabine sensitivity of intrahepatic cholangiocarcinoma cells via inhibiting β-catenin signaling pathway | |
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Bioengineered Rapamycin ameliorates chronic intermittent hypoxia and sleep deprivation-induced renal damage via the mammalian target of rapamycin (mTOR)/NOD-like receptor protein 3 (NLRP3) signaling pathway. | |
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