SDS裂解液

Cat No : PR20002

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产品介绍

Proteintech开发的SDS裂解液是一款裂解强度很强的裂解液,可用于从细胞、组织中制备变性蛋白裂解物。推荐用于Western Blot实验动物组织样品制备首选,SDS裂解液是一款快速裂解液,可以有效抑制蛋白降解。裂解得到的蛋白样品可以用于常规 Western Blot。SDS裂解液主要成分为Tris (pH7.4),SDS,NaF,EDTA-2Na,甘油等。


组分液体
SDS裂解液50 mL


保存条件

室温保存,一年有效。

使用方法

1. 对于细胞样品

(1)取适当量的裂解液,使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂混合液(货号:PR20032 / PR20016),用于磷酸化相关检测需要添加磷酸酶抑制剂混合液(货号:PR20015)。

(2)使用细胞刮收集细胞悬液(连同培养基一起收集),4℃,500 g离心5 min,收集沉淀,沉淀用预冷的PBS洗涤两遍,收集细胞沉淀,尽可能吸取残留的PBS。

(3)按每1000万细胞加入1 mL SDS裂解液。然后将裂解的样品放在冰上超声破碎,充分打断核酸序列。

2. 对于动物组织样品

取适当量的裂解液,使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂混合液(货号:PR20032 / PR20016),用于磷酸化相关检测需要添加磷酸酶抑制剂混合液(货号:PR20015)。取新鲜的动物组织,用预冷的PBS洗净组织块上附着的脂肪和血液等杂质,用滤纸吸干水分后称重。

a. 液氮研磨法:将剪碎的组织块在研钵中加入液氮,快速研磨至细粉状,转移至EP管中,按每100 mg组织加1 mL预冷的SDS裂解液,使用移液器上下吹打混匀,直至完全溶解。然后将裂解的样品放在冰上超声破碎,充分打断核酸序列。

b. 冷冻研磨机法:提前开启冷冻研磨机预冷,将吸干水分的组织样本剪成1-2 mm左右的小块,按照每管100 mg分装到2 mL离心管,同时每管加入1粒5 mm的研磨珠。将离心管和适配器放入液氮里浸泡速冻。将离心管和适配器转移到冷冻研磨机,使用65HZ研磨45秒,如果研磨效果不理想可中断15秒后重复研磨一次。每管加1 mL预冷的裂解液,使用移液器上下吹打混匀,直至完全溶解。然后将裂解的样品放在冰上超声破碎,充分打断核酸序列。

c. 匀浆法:在离心管中将组织块剪碎,然后在冰上,按每100 mg组织加1 mL预冷的裂解液。将样品转移到合适大小的预冷玻璃匀浆器中,在冰浴条件下对样品匀浆30-50次至充分裂解。 然后将裂解的样品放在冰上超声破碎,充分打断核酸序列。

鉴定方法:取20 μL匀浆30次后的组织样品加入等体积的0.4%台盼蓝溶液,混匀,在显微镜下观察台盼蓝溶液染色阳性(蓝色)细胞数目的比例,当阳性(蓝色)细胞破碎达到100%即说明裂解充分。若阳性(蓝色)细胞比例未达到100%,适当增加匀浆次数,随后按照同样的方法使用台盼蓝溶液进行鉴定。

注意:

(1)优先推荐选用液氮研磨法和冷冻研磨机法,其破碎效果最佳;其次推荐使用匀浆法,匀浆法易产生热量,加快降解。

(2)使用冷冻研磨机法对液氮速冻过的样本进行破碎,对离心管的材质要求比较高,需选用专用的离心管。

(3)加入SDS裂解液后,样品粘度会很高,无需在冰水放置30 min,可以直接冰浴进行超声破碎。

(4)SDS裂解液中含有浓度较高的去垢剂,温度过低会析出,推荐在4℃冰箱或加冰块的泡沫箱中操作即可。如果出现温度过低析出的情况,可将样品放在室温直至重新复容。

3. 对于植物、细菌等其它类型样本:具体步骤请参照文献或资料中特定样本相应的通用操作进行。

注意

1. 需自备蛋白酶抑制剂混合液(货号:PR20032 / PR20016)和磷酸酶抑制剂混合液(货号:  PR20015)。 

2. 不同的样品之间蛋白含量存在差异,可根据实际样品调整加入的裂解液体积。

3. 提取得到的总蛋白可以使用Proteintech的BCA蛋白浓度检测试剂盒(货号:PK10026)测定蛋白浓度,不适用Bradford法测蛋白浓度。

4. 裂解产物中可能会出现一小团透明胶状物,为含有基因组DNA等的复合物。在低温的条件下,用超声处理打碎打断该透明胶状物,随后10000 g离心取上清用于后续实验。

5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

6. 本产品仅用于科研,不得用于临床诊断或治疗。


附录1:Proteintech各种裂解液的特点

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附录2:Proteintech各种裂解液的选择

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