SDS裂解液

使用方法

1. 对于细胞样品

（1）取适当量的裂解液，使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂混合液（货号：PR20032 / PR20016），用于磷酸化相关检测需要添加磷酸酶抑制剂混合液（货号：PR20015）。

（2）使用细胞刮收集细胞悬液（连同培养基一起收集），4℃，500 g离心5 min，收集沉淀，沉淀用预冷的PBS洗涤两遍，收集细胞沉淀，尽可能吸取残留的PBS。

（3）按每1000万细胞加入1 mL SDS裂解液。然后将裂解的样品放在冰上超声破碎，充分打断核酸序列。

2. 对于动物组织样品

取适当量的裂解液，使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂混合液（货号：PR20032 / PR20016），用于磷酸化相关检测需要添加磷酸酶抑制剂混合液（货号：PR20015）。取新鲜的动物组织，用预冷的PBS洗净组织块上附着的脂肪和血液等杂质，用滤纸吸干水分后称重。

a. 液氮研磨法：将剪碎的组织块在研钵中加入液氮，快速研磨至细粉状，转移至EP管中，按每100 mg组织加1 mL预冷的SDS裂解液，使用移液器上下吹打混匀，直至完全溶解。然后将裂解的样品放在冰上超声破碎，充分打断核酸序列。

b. 冷冻研磨机法：提前开启冷冻研磨机预冷，将吸干水分的组织样本剪成1-2 mm左右的小块，按照每管100 mg分装到2 mL离心管，同时每管加入1粒5 mm的研磨珠。将离心管和适配器放入液氮里浸泡速冻。将离心管和适配器转移到冷冻研磨机，使用65HZ研磨45秒，如果研磨效果不理想可中断15秒后重复研磨一次。每管加1 mL预冷的裂解液，使用移液器上下吹打混匀，直至完全溶解。然后将裂解的样品放在冰上超声破碎，充分打断核酸序列。

c. 匀浆法：在离心管中将组织块剪碎，然后在冰上，按每100 mg组织加1 mL预冷的裂解液。将样品转移到合适大小的预冷玻璃匀浆器中，在冰浴条件下对样品匀浆30-50次至充分裂解。 然后将裂解的样品放在冰上超声破碎，充分打断核酸序列。

鉴定方法：取20 μL匀浆30次后的组织样品加入等体积的0.4%台盼蓝溶液，混匀，在显微镜下观察台盼蓝溶液染色阳性（蓝色）细胞数目的比例，当阳性（蓝色）细胞破碎达到100%即说明裂解充分。若阳性（蓝色）细胞比例未达到100%，适当增加匀浆次数，随后按照同样的方法使用台盼蓝溶液进行鉴定。

注意：

（1）优先推荐选用液氮研磨法和冷冻研磨机法，其破碎效果最佳；其次推荐使用匀浆法，匀浆法易产生热量，加快降解。

（2）使用冷冻研磨机法对液氮速冻过的样本进行破碎，对离心管的材质要求比较高，需选用专用的离心管。

（3）加入SDS裂解液后，样品粘度会很高，无需在冰水放置30 min，可以直接冰浴进行超声破碎。

（4）SDS裂解液中含有浓度较高的去垢剂，温度过低会析出，推荐在4℃冰箱或加冰块的泡沫箱中操作即可。如果出现温度过低析出的情况，可将样品放在室温直至重新复容。

3. 对于植物、细菌等其它类型样本：具体步骤请参照文献或资料中特定样本相应的通用操作进行。