SDS裂解液
Cat no : PR20002
Validation Data Gallery
Product Information
Proteintech开发的SDS裂解液是一款裂解强度很强的裂解液，可用于从细胞、组织中制备变性蛋白裂解物。推荐用于Western Blot实验动物组织样品制备首选，SDS裂解液是一款快速裂解液，可以有效抑制蛋白降解。裂解得到的蛋白样品可以用于常规 Western Blot。SDS裂解液主要成分为Tris (pH7.4)，SDS，NaF，EDTA-2Na，甘油等。
产品介绍
| 组分/规格 | 50 mL/100 mL |
| SDS裂解液 | 液体 |
保存条件
室温保存，一年有效。
使用方法
1. 对于细胞样品
（1）取适当量的裂解液，使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂混合液（货号：PR20032 / PR20016），用于磷酸化相关检测需要添加磷酸酶抑制剂混合液（货号：PR20015）。
（2）使用细胞刮收集细胞悬液（连同培养基一起收集），4℃，500 g离心5 min，收集沉淀，沉淀用预冷的PBS洗涤两遍，收集细胞沉淀，尽可能吸取残留的PBS。
（3）按每1000万细胞加入1 mL SDS裂解液。然后将裂解的样品放在冰上超声破碎，充分打断核酸序列。
2. 对于动物组织样品
取适当量的裂解液，使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂混合液（货号：PR20032 / PR20016），用于磷酸化相关检测需要添加磷酸酶抑制剂混合液（货号：PR20015）。取新鲜的动物组织，用预冷的PBS洗净组织块上附着的脂肪和血液等杂质，用滤纸吸干水分后称重。
a. 液氮研磨法：将剪碎的组织块在研钵中加入液氮，快速研磨至细粉状，转移至EP管中，按每100 mg组织加1 mL预冷的SDS裂解液，使用移液器上下吹打混匀，直至完全溶解。然后将裂解的样品放在冰上超声破碎，充分打断核酸序列。
b. 冷冻研磨机法：提前开启冷冻研磨机预冷，将吸干水分的组织样本剪成1-2 mm左右的小块，按照每管100 mg分装到2 mL离心管，同时每管加入1粒5 mm的研磨珠。将离心管和适配器放入液氮里浸泡速冻。将离心管和适配器转移到冷冻研磨机，使用65HZ研磨45秒，如果研磨效果不理想可中断15秒后重复研磨一次。每管加1 mL预冷的裂解液，使用移液器上下吹打混匀，直至完全溶解。然后将裂解的样品放在冰上超声破碎，充分打断核酸序列。
c. 匀浆法：在离心管中将组织块剪碎，然后在冰上，按每100 mg组织加1 mL预冷的裂解液。将样品转移到合适大小的预冷玻璃匀浆器中，在冰浴条件下对样品匀浆30-50次至充分裂解。 然后将裂解的样品放在冰上超声破碎，充分打断核酸序列。
鉴定方法：取20 uL匀浆30次后的组织样品加入等体积的0.4%台盼蓝溶液，混匀，在显微镜下观察台盼蓝溶液染色阳性（蓝色）细胞数目的比例，当阳性（蓝色）细胞破碎达到100%即说明裂解充分。若阳性（蓝色）细胞比例未达到100%，适当增加匀浆次数，随后按照同样的方法使用台盼蓝溶液进行鉴定。
注意：
（1）优先推荐选用液氮研磨法和冷冻研磨机法，其破碎效果最佳；其次推荐使用匀浆法，匀浆法易产生热量，加快降解。
（2）使用冷冻研磨机法对液氮速冻过的样本进行破碎，对离心管的材质要求比较高，需选用专用的离心管。
（3）加入SDS裂解液后，样品粘度会很高，无需在冰水放置30 min，可以直接冰浴进行超声破碎。
（4）SDS裂解液中含有浓度较高的去垢剂，温度过低会析出，推荐在4℃冰箱或加冰块的泡沫箱中操作即可。如果出现温度过低析出的情况，可将样品放在室温直至重新复容。
3. 对于植物、细菌等其它类型样本：具体步骤请参照文献或资料中特定样本相应的通用操作进行。
注意
1. 需自备蛋白酶抑制剂混合液（货号：PR20032 / PR20016）和磷酸酶抑制剂混合液（货号: PR20015）。
2. 不同的样品之间蛋白含量存在差异，可根据实际样品调整加入的裂解液体积。
3. 提取得到的总蛋白可以使用Proteintech的BCA蛋白浓度检测试剂盒（货号：PK10026）测定蛋白浓度，不适用Bradford法测蛋白浓度。
4. 裂解产物中可能会出现一小团透明胶状物，为含有基因组DNA等的复合物。在低温的条件下，用超声处理打碎打断该透明胶状物，随后10000 g离心取上清用于后续实验。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
6. 本产品仅用于科研，不得用于临床诊断或治疗。
附录1：Proteintech各种裂解液的特点
附录2：Proteintech各种裂解液的选择
