抗小鼠/兔通用型免疫组化检测试剂盒
Cat No : PK10006
Validation Data Gallery
产品介绍
该免疫组化检测试剂盒利用最新的聚合技术将多个过氧化物酶（HRP）分子及抗小鼠及抗兔免疫球蛋白 （IgG）偶联到多聚物上，形成的聚合物（二抗）具有放大信号、增加敏感度、减少非特异性背景特点。与兔或者小鼠一抗进行搭配使用，结合后再与 DAB 反应，可得棕色显色。该反应体系不含生物素和链霉亲和素，不受内源性生物素影响，背景极低；只需要二步反应，即可完成实验过程。同时本试剂盒配有一抗稀释液，可保证抗体的活性和稳定性，减少非特异性结合，降低非特异性背景染色。
注意：
* 如果您计划使用兔源一抗对小鼠样本进行染色，我们推荐使用抗兔免疫组化检测试剂盒（货号：PK10009）。
* 如果需要抗原修复液、复染试剂和封片剂，我们推荐使用兔/小鼠一抗自主全应用免疫组化试剂盒（货号：PK10019）。
组分/规格 | 1 mL | 6 mL | 18 mL | 55 mL | 110 mL |
山羊抗兔/小鼠 HRP 标记聚合物 | 1 mL | 6 mL | 18 mL | 55 mL | 110 mL |
DAB 原液 20× | 75 uL | 400 uL | 1 mL | 3 mL | 3 mL x 2 |
DAB 稀释液 | 1.5 mL | 8 mL | 20 mL | 60 mL | 120 mL |
一抗稀释液 | 4 mL | 24 mL | 72 mL | 220 mL | 440 mL |
3% H2O2 | 1 mL | 6 mL | 18 mL | 55 mL | 110 mL |
保存条件
该试剂盒应在 2-8℃避光保存，并在有效期（一年）内使用，不得冻存。
使用方法
以石蜡切片染色程序为例：
1. 将石蜡切片脱蜡水化：先将切片置于二甲苯中 20 分钟，2 次。然后依次在 100%，100%，95%，80%和 60%乙醇，每级放置 5 分钟。再用去离子水浸洗 3 次，每次 3 分钟。
2. 抗原修复：根据抗原抗体情况，必要时对切片进行抗原热修复：加入柠檬酸钠抗原修复液（50×）（货号：PR30001）或 tris-EDTA 抗原修复液（50×）（货号：PR30002）稀释成1×抗原修复液后，将切片放置微波炉，中火修复 2 次，每次加热煮沸后 5 分钟。结束后在修复液中自然冷却。然后用去离子水冲洗 3 次，每次 1 分钟。
3. 灭活（可选）：根据我们的经验，大多数情况下不需要对内源性过氧化物酶灭活，灭活有时甚至会对染色产生不利影响。然而该步骤在文献中有广泛提及，因此我们依然在该试剂盒中提供了内源性过氧化物酶灭活试剂。
3.1 载玻片用去离子水浸洗3次，每次1分钟。轻甩去载玻片上的液体，并用吸水纸吸干组织切片周围残留的液体。使用疏水性免疫组化笔（货号：PR30013）在组织切片周围的载玻片上画一个圆圈（可选）。
3.2 取 50-100 uL（依据组织大小）即用型3% H2O2涂在载玻片上，覆盖整个组织。将载玻片在室温下放置 10 分钟。阻断完成后用去离子水清洗载玻片，冲洗3次，每次1分钟。
4. 封闭：在室温下用封闭缓冲液（例如 3% BSA）封闭组织 30 分钟。不需冲洗，轻甩去载玻片上的液体。
* 试剂盒中的一抗稀释液也可用作封闭缓冲液的替代品。
5. 孵育一抗：滴加适当一抗稀释液稀释一抗（兔或小鼠一抗），室温孵育 1~2 小时或者 4 度过夜孵育。 TBS 冲洗 3 次，每次 1 分钟。
6. 孵育二抗：滴加 50-100 uL 抗兔/小鼠 HRP 标记聚合物，室温孵育 30 分钟，TBS 冲洗 3 次，每次 1 分 钟。
7. DAB 显色：滴加预制好的显色剂 DAB 工作液 50-100 uL，镜下观察并控制反应时间。去离子水浸洗3次，每次1分钟。
8. 显色后可以使用1% CuSO4水溶液浸泡5分钟以增强信号对比度，去离子水冲洗3次，每次1分钟（可选）。
9. 苏木素复染 2-3 分钟，然后TBS冲洗。在TBS缓冲液中返蓝5分钟后，用去离子水浸洗3次，每次1分钟。
10. 各级酒精（60-100%）脱水，每级 5 分钟。取出后置于二甲苯 5 分钟，2 次。用封片胶封片，显微镜观察。
注意
1.在抗原修复及后续免疫组化染色过程中都需避免组织切片干燥，保持湿润；
2.良好染色效果的获得很大程度上取决于标本制备和正确的实验方法，建议每批实验设置阴阳性对照；
3.本试剂盒一抗稀释液不能用于 HRP 标记一抗或者二抗的稀释；
4.DAB 工作液配制好后需避光保存，且最好在 30分钟内用完；
5.本说明书所提供的操作方法仅供参考，如遇特殊情况需要根据实际情况进行调整。
产品应用
DAB 工作液配制：在滴加 DAB 步骤前，将 DAB 原液与 DAB 稀释液按照 1 : 20 比例配制本次实验所需要的用量，混匀后避光备用。
Publications
| Application | Title |
|---|---|
Bioact Mater Type II collagen scaffolds repair critical-sized osteochondral defects under induced conditions of osteoarthritis in rat knee joints via inhibiting TGF-β-Smad1/5/8 signaling pathway | |
Redox Biol ent-Kaurane diterpenoids induce apoptosis and ferroptosis through targeting redox resetting to overcome cisplatin resistance. | |
JCI Insight A congenital CMV infection model for follow-up studies of neurodevelopmental disorders, neuroimaging abnormalities, and treatment. | |
Cell Rep Roseburia intestinalis sensitizes colorectal cancer to radiotherapy through the butyrate/OR51E1/RALB axis | |
Cancer Immunol Res Molecular Subgroups of Intrahepatic Cholangiocarcinoma Discovered by Single-Cell RNA Sequencing-Assisted Multiomics Analysis. | |
Nanoscale Immunogenic exosome-encapsulated black phosphorus nanoparticles as an effective anticancer photo-nanovaccine. |