流式细胞通透剂 (10×)

Cat No : PF00017



产品介绍

Proteintech 的 Flow Cytometry Perm Buffer(10×) 适用于非偶联或荧光偶联抗体的细胞内流式细胞术应用,如细胞因子和其他细胞质抗原的免疫荧光染色,可以最大程度地减少背景染色和增加信噪比。该试剂盒通过先在悬浮液中固定细胞再以通透细胞膜的形式帮助抗体进入细胞内,同时不对细胞表面染色后的荧光信号造成影响,并保持细胞形态特征完整。本产品为10×浓缩液,使用前需用蒸馏水稀释至1×工作液。

本产品含叠氮化钠(≦0.13%)。使用时需要做好防护措施,佩戴手套、穿实验服等,以避免接触眼睛或皮肤。

保存条件

4 ℃密封保存,一年有效。详见产品标签。

使用方法

1. 使用去离子水将 Flow Cytometry Perm Buffer(10×)稀释至1×备用。

2. 将细胞样品以适合的体积和细胞浓度分装到EP管中。

3. 按照抗体说明书中推荐的最佳浓度对细胞表面抗原进行染色。

4. 加入2mL PBS洗涤,用300-400g的离心力,离心5分钟后,弃上清。

5. 重复步骤4一次。

6. 加入0.2mL Flow Cytometry Fix Buffer(货号:PF00016)。室温下避光固定20分钟。

7. 加入1.8mL Flow Cytometry Perm Buffer(1×)洗涤。用400-600g的离心力,离心5分钟后,弃上清。

8. 再用Flow Cytometry Perm Buffer(1×)洗涤,用400-600g的离心力,离心5分钟后,弃上清。

9. 将细胞沉淀重悬在100uL的Flow Cytometry Perm Buffer(1×)中。

10. 按照抗体说明书中推荐的最佳浓度对细胞内抗原进行染色。

11. 用2mL Flow Cytometry Perm Buffer(1×)洗涤,用400-600g的离心力,离心5分钟后,弃上清。

12. 重复步骤11。(注:如此时裸眼不可见细胞,可省略本步骤直接进行下一步)

13. 加入0.2mL Flow Cytometry Perm Buffer(1×)重悬细胞。

在流式细胞仪上采集样品。(注:样本可保存在2-8℃,尽快上机检测)

注意

1. Flow Cytometry Perm Buffer(1×)没有使用完毕的不建议下次实验继续使用。

2. 因为皂苷介导的细胞透化是一种可逆过程,在细胞内染色期间必须将细胞保持在 Flow Cytometry Perm Buffer(1×)中。

3. 为了获得最佳实验结果,样品应在24小时内上机检测。

4. 实验时需要做好防护措施,佩戴手套、穿实验服。