流式检测磷酸化蛋白固定通透试剂盒
Cat no : PF00026
Validation Data Gallery
Product Information
Proteintech的流式检测磷酸化蛋白固定通透试剂盒（PF00026）是一种用于流式检测磷酸化蛋白的产品，适用于大部分磷酸化蛋白的流式检测。试剂盒中包括固定剂，通透剂及缓冲液。
本产品含有多聚甲醛，甲醇，FBS以及叠氮化钠（≦0.09%）。
产品组分
组分 | 货号 | 规格 |
1、固定剂，Fix buffer | PF00026-1 | 50 mL |
2、通透剂，Perm Buffer | PF00026-2 | 50 mL |
3、缓冲液，Staining Buffer(10X) | PF00026-3 | 100 mL |
保存条件
4 ℃密封保存，一年有效。详见产品标签。
使用方法
1.用PBS洗涤后的细胞，按1×10^6个细胞收集至EP中。加入0.5mL的Fix buffer，混匀后室温静置15min。使用400-600g的离心力，离心5分钟后，弃上清。
2.使用前将Perm Buffer冷却至 -20 °C。
3.加入0.5mL预冷的Perm Buffer，混匀后室温静置5min。使用400-600g的离心力，离心5分钟后，弃上清。(使用移液器将细胞吹匀即可)
4.实验前取1份Staining Buffer(10×)和9份超纯水混匀。
5.加入1.5mL Staining Buffer(1×)。混匀后，使用400-600g的离心力，离心5分钟后，弃上清。
6.重复步骤5。
7.加入0.1ml的Staining Buffer(1×)，与细胞混匀。
8.按照抗体说明书中推荐的最佳浓度对样本进行实验。
9.孵育完成后，加入1.5mL Staining Buffer(1×)洗涤细胞，用400-600g的离心力，离心5分钟后，弃上清。
10.重复步骤9。
11.使用Staining Buffer(1×)稀释二抗。加入0.1mL稀释好的二抗，混匀细胞。
12.孵育完成后，加入1.5mL Staining Buffer(1×)洗涤细胞，用400-600g的离心力，离心5分钟后，弃上清。
13.重复步骤12。
14.加入0.2mL Staining Buffer(1×)，将细胞沉淀重悬在Staining Buffer(1×)中。
15.在流式细胞仪上采集样品。
注意
1.本产品含有甲醛，甲醇，叠氮化钠，使用时需要做好个人防护措施，佩戴手套、穿实验服等，以避免接触眼睛或皮肤。
2.混匀时建议使用移液器混匀。
3.Perm Buffer破膜，对表面染色有影响，因此不适合先进行表面染色后再进行胞内染色。
4.孵育时，使液体覆盖住细胞，不要使细胞粘在管壁，防止出现阴性群。