GST 标签洗脱液(无Triton)

Cat No : PR40006



产品介绍

 GST Elution buffer洗脱原理是通过还原型的GSH和bead上的谷胱甘肽竞争结合融合蛋白,从而将标签蛋白从beads上洗脱。GST Elution buffer中加入tritonX-100能够蛋白的溶解度,加入甘油不仅能降低目标蛋白的极性,同时能保护目标蛋白的活性。对于目标蛋白失去活性的情况可以使用GST Elution buffer(no triton)。


 组分10mL
 Elution Buffer液体


保存条件

4℃下保存半年。

使用方法

GST beads纯化步骤

1. 将细胞裂解液高速离心,上清加入准备好的beads中,在旋转仪上4℃条件下旋转孵育至少1h。

2. 瞬时离心后,保留一些上清,用SDS-PAGE电泳检测介质结合能力,留beads。

3. 每0.5 mLbeads加1 mL GST洗涤液洗涤,瞬时离心后留beads;重复3次。

4. 每0.5 mLbeads加入0.6 mLGST Elution buffer,旋转仪于4℃条件下轻轻转动孵育1h;

5. 瞬时离心沉淀beads,保留上清液(相当于洗脱液),制样,用SDS-PAGE电泳检测洗脱得到的蛋白。

注意:

  •  GST融合蛋白与还原型谷胱甘肽的结合比较缓慢,为获得最大结合量,需要保证足够的作用时间。不同的GST融合蛋白结合效率差异显著。

  •  不同的GST融合蛋白取得最佳纯化效果所需还原型谷胱甘肽浓度,洗脱体积和洗脱时间可能有所不同。必要是需对流穿液,洗脱液进行SDS-PAGE以及Western杂交分析,以确定最佳纯化条件。

  •  GST检测试剂盒可辅助优化洗脱条件,分析纯化过程的每个步骤,该试剂盒主要用生化或免疫分析检测GST-tagged蛋白。

  •  A280处的吸收值可用来估算GST-tagged蛋白浓度,约A280~1对应浓度为0.5mg/ml。

  •  GST-tagged蛋白浓度也可用标准的显色方法测定(如Lowry,BCA,和Bradford法)。如果用Lowry法和BCA法,样品首先要脱盐,或在PBS中透析去除谷胱甘肽,因为谷胱甘肽会干扰蛋白的吸收,而Bradford法不受谷胱甘肽影响。

  • 介质的再次使用,主要取决于样品的性质,必须是同一个样品,防止交叉污染。

注意

1. 蛋白比较容易降解,务必保证每步在冰上进行,收集目的蛋白以后,请于 4℃ 或-20℃ 保存。

2. 为了安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。