小鼠单克隆抗体亚型鉴定试剂盒

使用方法

1. 材料准备 

从 4°C 中取出 Mouse 单克隆抗体亚型鉴定试剂盒，室温条件下平衡 30 分钟。 

a. 1×PBST : 10 mL 20×PBST + 190 mL 超纯水 

b. 酶标板条 : 根据样本数量选取酶标板条数（测定 1 个样本需要 1 条酶标板条），余下板条置于密封 袋中，4°C 保存。 

c. 1×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP : 10 uL 100×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP + 990 uL 1×PBST 

2. 样本准备 

a. 杂交瘤细胞上清 : 将样本以 1× PBST 1:100 稀释，例如 10 uL 杂交瘤细胞上清 + 990 uL 1×PBST。推荐稀 释范围为 1:20-1:200。 

b. 腹水 : 将样本以 1×PBST 1:100000 稀释，例如 1 uL 腹水 + 1 mL 1×PBST（1:1000），再取上 述混合液 5 uL + 495 uL 1× PBST。推荐稀释范围为 1:50000-1:200000。 

c. 纯化抗体 : 将样本以 1×PBST 稀释至 200 ng/mL，推荐稀释浓度为 20 ng/mL-1 ug/mL。 

3. 单克隆抗体亚型鉴定 

a. 将待测样本适当稀释加入板条样品孔中，50 uL/孔。

b. 无需孵育，将 1×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP 加入样品孔中，50 uL/孔。混匀器上轻轻混匀，也可用手轻轻敲击板架两侧 1 min。 

c. 盖上封板膜，室温孵育 1 h。 

d. 弃去孔内液体，1×PBST 洗板 3 次，吸水纸上拍干。 

e. 将现配的显色液加入孔中，100 uL/孔。 

注：显色液配方，A 液：B 液=1:100，即 10 uL A 液与 1 mL B 液混合，混匀后立即使用。 

f. 室温避光显色 10-20 min。每孔加入终止液，100 uL/孔。 

g. 结果判读。结果可以对照下图以肉眼判定，也可以通过酶标仪读取 OD450。颜色最深或是 OD 值最高孔对应的即为相应亚型。 

注：每个样本应该在 A-F 中有一个阳性孔（即是样本重链类型），G 和 H 中有一个阳性孔（即是样本轻链类型）。