小鼠免疫佐剂

Cat No : PR40009



产品介绍

本佐剂是一种 pH 中性的的稠性溶液,其中主要成份是高分子聚合物,该聚合物侧链上有强亲水基团,因此该产品可以与水溶液互溶,使用中无需乳化。其主链具有疏水性可以与蛋白质抗原结合(含用蛋白偶联的多肽或小分子化合物),并且可以保持蛋白结构不受影响, 注射至动物体内后可将结合的抗原缓慢释放,从而达到逐步刺激免疫系统的效果。 本佐剂自身无毒无免疫原性,因此免疫后动物健康(除非抗原本身有毒), 不会诱发肉牙肿,动物也不会针对佐剂本身产生抗体。 本佐剂免疫效果与弗氏佐剂相仿或略强,但毒性远低于弗氏佐剂。我司使用本佐剂免疫 BALB/c 小鼠 5000 多只,并成功开发出针对 1000 余种抗原的高品质单克隆抗体,应用范围覆盖 Western blot、IHC、IF、 IP、 Neutralization、间接 ELISA 和夹心 ELISA。这些小鼠的血清效价分布如下:

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我司免疫的 5040 只 BALB/c 小鼠血清效价分布(Cutoff OD=0.3), 小鼠全程于 SPF 环境饲养,免疫抗原约 90%为重组蛋白,10%为偶联载体的多肽,均按 48 天周期共免疫 3 针。



保存条件

温度对本品保存影响不大,开瓶前可放 4-40℃之间保存,保存期 5 年。开盖后请放 4℃防止长菌,并最好在一个月内用完。如果一个月内不能用完, 建议每次无菌取用或分装成多管,也可以在取用后盖好盖子 56℃ 加热半小时, 自然冷却后再放 4℃。

使用方法

  1. 用 PBS 或生理盐水将抗原浓度调整至 0.5-1.0 mg/mL。根据免疫原性强弱取出适量体积的抗原:(1)绝大部份蛋白质按每只老鼠每针 40-80 μg 免疫,免疫原性极强的蛋白可减少至每只老鼠每针 20 μg;(2)偶联载体的多肽或小分子化合物按每只老鼠每针 80-150 μg(不计载体的量);(3)目前未测试过全病毒或全菌抗原,建议折算成总蛋白的质量参考蛋白抗原剂量免疫。

  2. 按箭头方向打开佐剂瓶盖,小心操作防止铝盖划手。取等体积的佐剂与抗原混合,混合后总体积为每只小鼠 100-300 μL 间为宜,通过皮下或腹股沟多点免疫,每个点免疫 30-50 μL

  3. 第 21 天以同样剂量同样方式加强免疫,第 35 天可进行效价检测。约有 70% 的小鼠在第 35 天可以达到较高效价。

  4. 如第 35 天效价低于预期,可以第 35 天左右以同样剂量同样方式再加强免疫一针。第 45-48 天进行效价检测,此时至少 95%小鼠效价达到峰值。如果效价仍低于预期,额外的加强免疫通常不会大幅提高免疫效果。

  5. 如实验目的是取脾脏进行细胞融合制备单抗,建议在最后一次加强免疫后两周左右进行一次冲击免疫,抗原免疫剂量为首次免疫剂量的三分之一左右,抗原用 PBS 或生理盐水稀释至 0.3 mL 进行腹腔注射。冲击免疫后 48-72 小时进行细胞融合。

注意

  1. 本佐剂用于小鼠效果较好,用于兔或其他动物效果略差。

  2. 免疫前请确认抗原对动物无毒害,抗原 buffer 中不含有害成份如盐酸胍、 去垢剂等,但可以含有 4M 以下尿素。本佐剂缓冲能力强于 PBS,请确保抗原溶液本身 pH 在 5-9 之间,从而与佐剂混合后可以被缓冲至中性。

  3. 二价金属离子如 Fe2+、Mg2+、Mn2+、Cu2+、Ca2+可能影响本佐剂的稳定性, 也可能形成沉淀,抗原中最好不含高浓度二价金属离子(不高于 1 mM)。

  4. 免疫中抗原体积过少可能在操作中因容器吸附而有损失,体积过大会导致抗原释放速度过慢从而可能导致效价偏低。

  5. 开盖时请按箭头方向开启,小心操作防止铝盖划手。